本文是由浙江中医药大学附属第一医院肝胆外科黄捷等人开展的，有关人参皂苷Rg3通过内质网应激PERK通路抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤生长的研究。研究表明人参皂苷Rg3通过激活胆囊癌细胞内质网应激PERK通路，抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤生长。
材料与方法
01
细胞来源
人胆囊癌细胞GBC-SD购自上海复祥生物科技有限公司，人胆囊癌细胞加入RPMI1640培养基中，放入37℃、5%CO2细胞培养箱培养。
02
实验动物
5周龄雄性BALB/c裸鼠12只，体重约20~23g，购于常州卡文斯实验动物有限公司，在浙江中医药大学动物实验中心SPF级动物房普通饲料喂养，自由饮水。
03
动物模型的建立
采用随机数字表法将裸鼠分为人参皂苷Rg3灌胃组和对照组各6只。取指数生长期人胆囊癌细胞GBC-SD，用PBS洗涤3次，重悬于PBS中并调整浓度为5×106/ml，于每只裸鼠右侧腹股沟皮下注射0.2ml细胞悬液，细胞悬液接种7d后，观察成瘤情况。待肿瘤长至50~70mm3开始进行灌胃处理，人参皂苷Rg3组将人参皂苷Rg3按20mg/kg剂量溶于0.2ml 0.9%氯化钠溶液后灌胃，对照组用0.2ml 0.9%氯化钠溶液灌胃，1次/d，连续给药3周。
04
瘤体积和瘤体质量测量
灌胃处理开始后每隔3d以游标卡尺测量肿瘤长、短径并计算瘤体积直至第21天灌胃结束，瘤体积＝（肿瘤长径×肿瘤短径2）/2。21d后处死小鼠，切除肿瘤并称重后，冻存组织以备后续实验。
05
p-PERK、PERK、p-elF2α、elF2α、ATF4和Lcn2蛋白表达水平检测
采用Western blot法。取冻存组织按照RIPA裂解液说明书裂解，BCA法测定蛋白浓度，绘制标准曲线。加入ECL发光液，曝光后用Image J 软件分析，蛋白质的相对表达为每个蛋白与内参蛋白的灰度值的比值。
06
统计学处理
采用SPSS 19.0统计软件。计量资料以表示，组间比较采用两独立样本t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。
结果
01
两组裸鼠瘤体积和瘤体质量比较
人参皂苷Rg3灌胃组裸鼠瘤体质量明显低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.01）。灌胃9d内，两组裸鼠肿瘤体积大小比较差异均无统计学意义（P＞0.05）；但灌胃12d开始，人参皂苷Rg3灌胃组裸鼠瘤体积较对照组均明显减小，差异均有统计学意义（P＜0.01），提示人参皂苷Rg3能抑制肿瘤体积增长，见表 1。
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01
两组内质网应激 PERK 通路相关蛋白表达水平比较
人参皂苷Rg3灌胃组裸鼠p-PERK、p-elF2α、ATF4和Lcn2蛋白表达水平均明显高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.01）；但两组裸鼠PERK和elF2α蛋白表达水平比较差异均无统计学意义（均P＞0.05），提示人参皂苷Rg3能够激活内质网应激PERK信号通路，见表2和图1。
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讨论
本研究表明人参皂苷Rg3灌胃能明显抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的生长，同时人参皂苷Rg3没有增加PER和eIF2α蛋白表达。人参皂苷Rg3灌胃组p-PERK、p-eIF2α、ATF4和Lcn2蛋白表达水平明显高于对照组，表明人参皂苷Rg3能引起PERK、eIF2α磷酸化并增加ATF4、Lcn2蛋白表达，证实人参皂苷 Rg3 在体内激活PERK通路的重要作用，人参皂苷Rg3在体内通过激活内质网应激PERK通路，抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤生长。