人参皂苷经PI3K/AKT通路诱导乳腺癌细胞凋亡
 

本文是由延边大学医学院组织胚胎学教研室朴丽花开展的研究,为了探讨人参皂苷Rg3经磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)通路对人乳腺癌MCF7/Adr细胞的诱导凋亡作用。研究表明人参皂苷Rg3能诱导体外培养的人MCF7/Adr细胞凋亡,抑制PI3K、AKT活性是人参皂苷Rg3诱导MCF7/Adr细胞凋亡的重要机制之一。

细胞培养: 

MCF7/Adr细胞用含10%胎牛血清的DMEM培养基,37℃,5%CO2、95%空气饱和湿度培养箱培养,每2天更换1次培养液,0.25%胰蛋白酶消化传代。

观察指标: 

MTT法观察GS-Rg3对细胞活力的影响;流式细胞仪检测细胞凋亡率;Westernblot法检测PI3K、AKT蛋白表达。

统计学方法: 

用SPSS16.0软件进行统计学处理,实验数据以均值±标准差表示,组间比较采用t检验。 

结果: 

(1)GS-Rg3对MCF7/Adr的生长抑制作用 

80μmol/LGS-Rg3分别作用于MCF7/Adr细胞24、48、72h后测定抑制率。随着药物浓度的增加及作用时间的延长,细胞抑制率明显增加,其中80μmol/LGS-Rg3对细胞的抑制作用最明显。各实验浓度及时段的结果与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05,表1)。

(2)荧光染色检测细胞凋亡 

经Hoechst33258染色后,荧光显微镜下可见对照组(图1A)细胞核圆而大,染色质分布均匀,表现为弥散均匀的荧光;GS-Rg3不同浓度组(图1B、C)细胞核数目明显减少,有大量固缩变形的细胞核,染色质浓缩,表现为浓染致密的荧光颗粒,有凋亡小体形成,尤其GS-Rg3大剂量组(图1D)凋亡最明显;细胞凋亡核占(75.45±5.2)%。与对照组相比,P<0.05。

(3)GS-Rg3对MCF7/Adr细胞凋亡率的影响 

流式细胞术检测MCF7/Adr细胞凋亡结果,经GS-Rg3作用MCF7/Adr细胞后,MCF7/Adr细胞凋亡率明显增高,对照组细胞凋亡率为(4.43±0.21)%,5、10、20、40、80μmol/LGS-Rg3组细胞凋亡率分别为(12.51±2.54)%、(19.20±1.63)%、(31.27±7.91)%、(53.15±16.24)%、(66.18±13.26)%,与对照组相比差异有统计学意义,P<0.05。

(4)Westernblot法检测PI3K、AKT蛋白表达不同浓度GS-Rg3 

作用MCF7/Adr细胞48h后,提取细胞总蛋白,Westernblot检测结果显示,与对照组相比,不同浓度GS-Rg3均能降低MCF7/Adr细胞中PI3K、AKT蛋白表达(P<0.01,图2),PI3K、AKT蛋白表达随GS-Rg3浓度的增加逐渐下降,并呈剂量依赖关系。

结论: 

本组实验结果证明GS-Rg3对人乳腺癌MCF7/Adr细胞有较强的增殖抑制及诱导凋亡的功能。抑制PI3K/AKT通路可能是GS-Rg3体外诱导MCF7/Adr细胞发生凋亡的重要机制之一,从而发挥抗肿瘤作用。

本文文献来源:朴丽花,蔡英兰,张默函,姜京植,金政,许祖德.人参皂苷经PI3K/AKT通路诱导乳腺癌细胞凋亡[J].临床与实验病理学杂志,2013,09:946-949.